Page 26 - Lactopress Julio 2024
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Tecnología Láctea
Tabla 1. Condiciones de crecimiento de microorganismos
Para activar las cepas, cada vial se descongeló a temperatura
ambiente y se inoculó 50 μL de muestra en el agar
correspondiente mediante un asa que se estiró a través de la
cultura turbia extendida en el agar especificado (Tabla 1), e
incubado en una atmósfera microaerofílica a la temperatura
(Tº en ºC) y tiempo (h) establecidos para alcanzar la fase
estacionaria temprana, la cultura nocturna. Después de este
tiempo, se seleccionó una colonia única y se inoculó en 5 mL
de cultivo líquido, y luego se realizó un segundo cultivo (2ª
generación). Las células se obtuvieron mediante
centrifugación del cultivo líquido a 5000 rpm / 10-15 minutos a
temperatura ambiente en una centrífuga Sigma 3-16K 10280. El
sobrenadante se descartó y las células se lavaron. Además, se
añadió solución salina tamponada con fosfato (PBS) estéril a
los botones de las células, y se mezcló en el vortex (KMC 1300v),
este procedimiento se realizó dos veces. Después de este
lavado, las células se resuspendieron en el cultivo líquido
utilizando un vortex, posteriormente, la concentración inicial
de densidad óptica (OD600) se estandarizó en 0,8 ± 0,1 en un
espectrofotómetro Spectronic® 3w2R179001 genesys 2PC.
2.3. Crecimiento cinético en medios de cultivo
convencionales
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